手把手教你DIY小动物透明骨骼染色标本!
本帖最后由 zxyso4 于 2014-6-7 01:50 编辑

也许有人已经看到过了网上的日本生物学家制作透明染色标本
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透明骨骼标本的魅力就在于精确而直观地向我们展示了生物体的骨骼解构与位置犹如X光片一样,并且还是立体的,
也避免了传统的解剖取骨清洗再组装而导致的骨骼相对位置的改变,
同时通过染色将骨骼染成绚丽的颜色,使各种精细结构也展露无遗!
那个日本生物学家也给出了制作方法,但是太麻烦!所用试剂过多!没有一定条件要制作还真是很麻烦,而且有些试剂很贵的 = =(←这才是重点)
其实,透明骨骼染色标本的制作没有那么复杂!特别是小型动物,只用一些基础的试剂就可以制作出非常美丽的标本~!
这些艺术品可以用来当摆件,也可以收藏~而且~我发现很多妹子都超喜欢这样的小礼品,哪怕她是文科生~~(嘿嘿,下面的还用我教你?)
好啦,废话不多说~下面lz我就把我制作标本的过程一步步的发上来!手把手教你做~!
---------------------------------------------------------------我是废话和正题间分割线 = =----------------------------------------------------------------------------------------------
首先当然是试剂准备啦!(我相信在一个常年混KC的KCer的实验室里以下试剂都是常备~):

蒸馏水(整个制作过程最好都用蒸馏水,制作效果最好!没有?屈臣氏提一桶去~)
95%乙醇
甘油
脂溶性溶剂
氢氧化钾KOH
3%过氧化氢H2O2
茜素红S(万能的TB,25g,18左右)
麝香草酚(万能的TB,25g,18左右)

仪器物品:

制作标本时的反应容器,要能加盖密封
镊子一把
小号注射器一根
承装标本的容器,各种漂亮的玻璃瓶都成~!

接下来是动物体的选择:
尽量采用完整无伤的动物体制作(当然专门制作特殊病理形态除外),不一定要鲜活动物体,甚至不新鲜的尸体都可以,只要骨骼完整。动物体不要过大,体长3~5cm就好,大的可以6~8cm,最好不超过10cm,否则透明效果不好。注意幼年期的动物,骨骼很多还是软骨,染不上色的!(顺便说一句茜素红S是和钙盐结合而染色,所以只有成熟骨组织才能上色)

然后,为了后面制作方便,先配置以下试剂,单独存放,随用随取:
预透明剂:2%KOH水溶液(要多配点,分作以下试剂基础)
染色剂:将茜素红S配制成95%乙醇饱和溶液(溶解度很低但颜色很深,不要加太多染料),将此饱和溶液加入9倍体积1%KOH水溶液内(稀释10倍)
脱色剂:将30%H2O2稀释至3%
透明脱色剂:1%KOH的20%甘油水溶液(将2%KOH,纯甘油,蒸馏水按5:2:3体积混合)
梯度透明剂:50%甘油水溶液,纯甘油

下面就开始制作啦!(这里用两条鱼做演示)
动物体处死与处理:
鱼类用40度温水处死,不能用开水,处死后在流水中刮去身侧大部分鳞片,不求刮干净,不剖腹,不去皮。
其他动物可采用窒息的方式处死,处死后剥皮,尽量去尽皮下脂肪,剖腹取尽内脏,注意不要伤及肋骨,冲洗干净

固定:
将处理好的动物用95%乙醇固定,不用整姿,液体量要没过标本(下同,液量均需没过标本),24小时后换新乙醇一次。换乙醇后固定一周以上时间。
鱼类可以在换液的时候顺便剥皮,这时候鱼皮被乙醇固定发硬,可以整块撕下,要不后期剥皮很麻烦!3cm以下的鱼就不用剥皮了
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鱼肉鱼鳍都变成白色了,仔细看的话因为95乙醇强烈的脱水作用,还有皱纹 = =

脱脂:
这一步是可选步骤!如果动物体比较大(5cm或以上)或者是肉食性鱼类则需要脱脂,将固定动物的乙醇倒出来另放,用脂溶性溶剂浸泡脱脂48小时以上(可以用丙酮、乙醚、乙酸乙酯等等都可以!只要和高浓度乙醇混溶就可以~如果这些不好找的话,还有一个便宜量又足的选择——香蕉水!随便一个五金铺子三五块就买到一大瓶!),48小时以后倒掉溶剂,把乙醇倒回去浸泡一天以彻底去除溶剂。

脱醇复水:
倒掉乙醇,倒入蒸馏水将标本浸泡至残余乙醇完全溶出标本沉底为止,其间不时摇晃容器并换水1~2次,最后一次换水以后泡一晚上。
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标本因为富含酒精而浮起来,要一直泡到沉下去为止!

预透明:
倒掉蒸馏水,倒入2%KOH溶液预透明,要随时观察,当标本整体变为半透明以后后再过一小时左右容器底部会有有少量血水流出,此即标志透明时间合适。(大约4小时左右),过度透明的话会散架的。。。。
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对比明显,KOH一倒进去薄弱的地方立刻变得透明起来~然后逐渐向厚的地方扩展~
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透明到这种透明程度(对着光看)以及底部有黄色血水流出就说明时间够了
同时因为碱的作用,鱼鳍会尽数展开,所以前面不用担心鱼鳍缩起来
要注意的是透明以后标本整体已经非常柔软易碎,此后所有步骤必须避免直接接触标本,小心操作!换液也要快而且轻,尽量保证标本一直处于液体环境中,因为它已经软来撑不起自己的体重了。。。。

染色:
倒掉KOH溶液,倒入染色液,染色时间冬天48~72小时,夏天24~48小时。
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黄色的茜素红酒精溶液一加入KOH立刻变成深紫红色,随pH而变色~

脱浮色:
染液可以重复用的,用蒸馏水洗去标本表面浮色,并用蒸馏水浸泡标本直到无浮色溶出标本肌肉呈淡粉色为止(约两天),看着颜色深了就换水。
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刚开始用水洗的时候隔一会儿浮色就把水染的很深,所以要勤换水
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一直要泡到像这样没有浮色了才可以!

脱色:
倒掉蒸馏水后,倒入3%H2O2脱色,脱色时会产生大量气泡使标本浮起。脱色时间以标本软组织完全脱去颜色,以及身体上的黑色部位(如眼睛、鱼鳍等)全部变为黄褐色为准,越长越好。
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标本里面会产生很多泡泡,所以浮起来成这样一个奇葩姿势,不过在这里我发现一个不同,那条小鲶鱼是尸体制作的,从始至终基本上就没有泡泡!
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这是一组对比,上面的鰟鮍没有用H2O2脱色,直接进入下一步,可以看到肌肉的颜色完全脱掉了,但整个头部,特别是眼睛,色素沉积还是非常严重,显得黑黑的,鱼皮也有点泛黄
而下面的食蚊鱼用H2O2脱色后好很多,眼睛自身的黑色素也给脱去了,鱼皮也没有颜色,整个要清新、干净得多。

精处理:
在脱色后将标本连带双氧水倒入培养皿里,如果是小鱼前面没有剥皮的话,此时鳞片亦被染成红色,很容易就去除没有刮干净的鳞片,标本体内生成的气泡用小注射器穿刺吸出来,吸掉大的气泡就可以了,小的不用管。处理后小心地将标本放回容器,用蒸馏水浸泡过夜除尽双氧水。
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一定要连水一起倒出来,标本很脆弱的这时候!去鳞很好去,都不用刀,镊子尖轻轻一刮就好了
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LZ就是前面没有剥皮,这会儿剥皮麻烦死了!标本已经软得根果冻一样!完全没有着力点!

再脱色与透明:
倒掉蒸馏水,倒入20%甘油透明脱色剂进一步与脱色与透明,倒入后因为密度差异,标本会浮起来,先平置容器15分钟待标本沉下后再恢复直立。透明时间为一周左右,待软组织浮色去尽,黑色部分(眼睛)由黄褐色变为透明或浅黄色后即可。大概要一周左右!这个透明剂里也有KOH!时间太长也会散架的哦!而且,标本体内的小气泡会在此步中缓慢溶解掉,最后全部消失。
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先横放一会儿,要不然标本浮起来会折起来的,放个10来分钟就沉下去了
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这里是lz血的教训啊!!![s:441] lz嫌大鱼透明得慢就给它水浴加热了一下!!结果!不到半小时整体散架了!!![s:441] 再次深切提醒心急吃不了热豆腐[s:441]
不加热的放一周多都没问题的!而且越来越透明!

梯度透明
倒掉20%甘油,倒入50%甘油(不含KOH),透明约一周左右,再用纯甘油彻底透明,一周以上。这一步要注意:50%及以上浓度甘油粘稠,对流不易,要不时振摇容器使标本中的低浓度甘油彻底溶出。同时气泡在甘油里面不会溶解,所以这一步一定要小心不要代入气泡。
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同样每次换高浓度后要平躺一会儿~刚放进去因为密度差异,还看得到透明的肉~
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慢慢甘油渗进去以后就会变得很透明了~
怎么样,已经有那么一回事了吧~?

最后就是装瓶啦~
用新的纯甘油把标本浸泡在选好的标本瓶里密封,放一粒麝香草酚晶体防腐就大功告成了~(晶体会慢慢溶解掉)
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这样就大功告成了!(还可以看到那一粒麝香草酚晶体~)
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头部
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身体
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尾鳍
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胸鳍以及小得不能再小的腹鳍~(鲶鱼从肚子一直连到尾巴的是臀鳍)
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鲶鱼背鳍已经退化,只在脊椎骨那里有一点点背鳍骨的残迹~

=============分割线========================
下面是楼主做的其他的一些成品~也发上来给大家看看~~~
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一只胖头鱼的鱼苗~
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鰟鮍
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食蚊鱼(平时拿来作饲料鱼的)

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胖头鱼和鰟鮍都是鲤科鱼类~鲤科鱼类每个肌节间都有Y形肌间刺,没错就是张爱玲“一恨鲫鱼多刺”的刺,这个用一般方法可是真不好显示啊~~~
中过招的童鞋自己举手~

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鲤形目和鲇形目的最前面1-3枚脊椎骨的某些成分会变异形成一组具有特定功能骨片,叫做韦伯氏器。
其实就是连接鱼鳔和内耳的听骨链,这样鱼鳔感受到的震动可以传达到内耳形成听力!增强感知范围!

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食蚊鱼属鳉科,每根肋骨上都有个小岔~

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没想到1、2cm长的吃杂物的食蚊鱼也是有“牙齿”的!

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蛙类也有“牙齿”

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蛙“手”。。

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最后来一张展示全家福~

总结:
其实透明骨骼标本的制作一点都不难,试剂也好找,虽说总体做下来要耗费大概一个月左右,但其实其中大部分时间都是在等它自己反应而已。
我们只要算好天数去换个液或者摇一下就是了,一点也不费事。而且!可以同时做!一做就是一批!只要提前把试剂配好,一批一批的做都可以大量产出了。。。就是比较费酒精,不过我相信这也不是个问题。。。
最后呢就是想说楼主这个方法和那个日本科学家的方法不冲突,楼主的方法比较适合小型鱼,简单方便,而大型鱼还是要靠日本的方法,要用胰蛋白酶消化掉大量的肌肉,而且做出来还没有小鱼这么晶莹剔透。
同时日本方法还加了 阿利新蓝 这个是软骨染色剂,可以把软骨染成蓝色,而硬骨是红色更漂亮,特别是对于软骨鱼类和幼体动物(鲨鱼,鳐鱼之类的),骨骼都是软骨,非要阿利新蓝才能上色! 但唯一的缺点就是阿利新蓝好贵的。。。一克就要一两百。。。楼主没米所以就不用了。。。。这样已经很好了不是吗~?
想要用的童鞋在标本固定好以后复水之前用阿利新蓝酒精溶液泡一天就可以了,其他步骤完全一样。
+100  科创币    helium   2014-06-07   感谢分享
+50  科创币    St_Maxwell   2014-06-07   卧槽好屌啊。。
+50  科创币    罗布   2014-06-07   好屌
+25  科创币    b2353497   2014-06-07   漂亮!
+150  科创币    焓熵`   2014-06-07   精品
+25  科创币    五成熟的牛排   2014-06-07   漂亮
+3  科创币    alexchow   2014-06-07   高质量发帖
+50  科创币    ms1175555   2014-06-07   太漂亮了
+40  科创币    泥子二号   2014-06-07   感谢分享
+50  科创币    达闻西   2014-06-07   精品~
+50  科创币    张静茹   2014-06-07   技术长贴,大赞
+10  科创币    静观&琪变   2014-06-07   都给你了
+90  科创币    thallium2012   2014-06-07   高质量发帖
+1  科创币    qwe   2014-06-07   好残忍
+50  科创币    ne555   2014-06-07   太赞了
+10  科创币    天机   2014-06-07   再接再励
+10  科创币    发电机   2014-06-07   高质量发帖
+30  科创币    池塘   2014-06-07   高质量发帖
+25  科创币    幻痛的心   2014-06-07   今天的所有分,给你了,楼主
+50  科创币    北落师门   2014-06-07   高质量发帖
+20  科创币    sunnywind   2014-06-08   挖艹··好详细的教程啊···
+50  科创币    向钱看向厚赚   2014-06-08   
+10  科创币    龙之舞   2014-06-08   高质量发帖
+50  科创币    阿飘先生   2014-06-08   叼到不行~
+501  科创币    game00over   2014-06-24   感谢分享
+50  科创币    q81919119   2014-07-21   高质量发帖
来自:科创广场 / 极客DIY
 
5
zxyso4 作者
6年11个月前
1楼
呼~沙发必须自己坐~!打了好久终于打完了~!
祝大家都能做出满意的标本!
有任何问题欢迎讨论~!
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我说要有光
6年11个月前
2楼
动辄要用几天一周的时间,而且每一步都必须小心翼翼,感觉挺锻炼(zhé mó)人的。。。

能制作出这种东西的人肯定心态特别的好
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zxyso4作者
6年11个月前
3楼
我说要有光 发表于 2014-6-7 01:47
动辄要用几天一周的时间,而且每一步都必须小心翼翼,感觉挺锻炼(zhé mó)人的。。。

能制作出这种东 ...


又不是每天都要去弄,平时放在那里就好了啊,只是说换液的时候要小心着点
当然了,想要做出好东西必须有耐心
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千斤拨四两
6年11个月前
4楼
这个不错,到时候泡妹子。
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王WZJ_97
6年11个月前
5楼
很漂亮[s:101]
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St_Maxwell
6年11个月前
6楼
千斤拨四两 发表于 2014-6-7 05:30
这个不错,到时候泡妹子。


用这个整不好会吓到妹子。
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renliuxin
6年11个月前
7楼
关注一下~~
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伺服器
6年11个月前
8楼
哎呀妈呀,科学家啊。
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lxj勇敢的心
6年11个月前
9楼
极品好帖,收藏了,有时间做一个炫耀一番
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博丽灵梦
6年11个月前
10楼
等我明天有分了再来加~
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凤凰院hark
6年11个月前
11楼
太赞
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硝基丙三醇
6年11个月前
12楼
大神呀
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幻痛的心
6年11个月前
13楼
适用于所有生物标本,比看惨白的白骨强多了,这要做人体标本,医学院的乐趣会变多的,特别是用荧光剂,半夜看,特带感[s:9]
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中子核
6年11个月前
14楼
大赞   我一定得试试     刚好化学药品全有^ω^
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zxyso4作者
6年11个月前
15楼
last-order 发表于 2014-6-7 07:21
用这个整不好会吓到妹子。


据lz目前的数据来看,妹子们都超级喜欢[s:436]
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zxyso4作者
6年11个月前
16楼
幻痛的心 发表于 2014-6-7 11:27
适用于所有生物标本,比看惨白的白骨强多了,这要做人体标本,医学院的乐趣会变多的,特别是用荧光剂,半夜 ...


有啊,有做胎儿骨骼染色的,成人体积太大,做不出来的
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达闻西
6年11个月前
17楼
楼主做得木乃伊好漂亮~这个应该被设为精华帖啊,太厉害了。
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zxyso4作者
6年11个月前
18楼
达闻西 发表于 2014-6-7 13:05
楼主做得木乃伊好漂亮~这个应该被设为精华帖啊,太厉害了。


这是“湿尸”所以不能叫木乃伊吧[s:9]
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张静茹
6年11个月前
19楼
大赞 很好看,我以为是用龙胆紫染色的呢
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张静茹
6年11个月前
20楼
大赞 很好看,我以为是用龙胆紫染色的呢
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go炮君
6年11个月前
21楼
极品教程,就是不太忍心看到小生命为了这点而献出生命,以后捡两条死鱼
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wuncle
6年11个月前
22楼
好帖,收藏!
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腐蚀硫磺
6年11个月前
23楼
真漂亮,这个标本可以研究存放吗?那种鱼最好做?
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幻痛的心
6年11个月前
24楼
zxyso4 发表于 2014-6-7 12:50
有啊,有做胎儿骨骼染色的,成人体积太大,做不出来的


幼儿和没能出生的孩子做的标本还是··算了,总觉得这样有失道德,个人发言,楼主勿怪,才看到一个“弃婴岛”报道,开着轿车遗弃6岁女童(从车上将熟睡的孩子摔出来,弃置),遗弃儿童这种事让人心里不是滋味。所以···哦,忘了给楼主加分了····呵呵
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火焰山
6年11个月前
25楼
胖头鱼?是地图吗。。。
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玄明
6年11个月前
26楼
幻痛的心 发表于 2014-6-7 11:27
适用于所有生物标本,比看惨白的白骨强多了,这要做人体标本,医学院的乐趣会变多的,特别是用荧光剂,半夜 ...


听说医院做骨骼标本都要把尸体放锅里煮,煮到快熟的时候再把肉剥下来。有些人制作标本也会埋在沙子里自然腐烂,但这两种方法最后都会连筋腱一起处理掉了,出来的骨头是散开的,还得往一起拼,那才叫辛苦。所以LZ的方法相对来说非常简单轻松了。
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sunnywind
6年11个月前
27楼
话说阿利新蓝好贵··某宝上还不易找到~~
这个不用就显示不出软骨而已[s:12]
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zxyso4作者
6年11个月前
28楼
幻痛的心 发表于 2014-6-7 22:13
幼儿和没能出生的孩子做的标本还是··算了,总觉得这样有失道德,个人发言,楼主勿怪,才看到一个“弃婴 ...


医学院医学研究之用,大多是捐赠的。同时我们对于这些遗体也同样充满敬畏!
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zxyso4作者
6年11个月前
29楼
火焰山 发表于 2014-6-7 22:24
胖头鱼?是地图吗。。。


花鲢、胖头、雄鱼,学名鳙
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zxyso4作者
6年11个月前
30楼
玄明 发表于 2014-6-7 23:14
听说医院做骨骼标本都要把尸体放锅里煮,煮到快熟的时候再把肉剥下来。有些人制作标本也会埋在沙子里自然 ...


对!还要脱脂、漂白、消毒、烘干,上清漆保护,最后按照顺序用钢丝串联起来
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zxyso4作者
6年11个月前
31楼
sunnywind 发表于 2014-6-8 00:08
话说阿利新蓝好贵··某宝上还不易找到~~
这个不用就显示不出软骨而已


有啊,1g一两百
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zxyso4作者
6年11个月前
32楼
腐蚀硫磺 发表于 2014-6-7 18:44
真漂亮,这个标本可以研究存放吗?那种鱼最好做?


可长期存放,注意不要阳光直射,否则时间久了可能泛黄
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zxyso4作者
6年11个月前
33楼
张静茹 发表于 2014-6-7 14:25
大赞 很好看,我以为是用龙胆紫染色的呢


龙胆紫可以做植物的哦~
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龙之舞
6年11个月前
34楼
制作这个我好像在果壳也看到过
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St_Maxwell
6年11个月前
35楼
敢问lz是不是,呃,生理学?解剖学?有关的专业生。
P.S.看到头像就猜到一半了。。。
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兰若,公主魂
6年11个月前
36楼
[s:14]有点瘆人,用死鱼吧,骚年,我现在杀鱼都是直接让它自然死,同情心又泛滥了。
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俗世怂人
6年11个月前
37楼
杀鱼用四十度温水杀的死?
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1007643735
6年11个月前
38楼
很好看,感谢分享
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fengjianhong
6年11个月前
39楼
请问楼主,那种外骨骼的螃蟹,虾啥的咋去肉呢
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zxyso4作者
6年11个月前
40楼
龙之舞 发表于 2014-6-8 07:28
制作这个我好像在果壳也看到过


果壳那个是我上面说的日本方法
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zxyso4作者
6年11个月前
41楼
兰若,公主魂 发表于 2014-6-8 13:02
有点瘆人,用死鱼吧,骚年,我现在杀鱼都是直接让它自然死,同情心又泛滥了。


那样它更痛苦。。。
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zxyso4作者
6年11个月前
42楼
俗世怂人 发表于 2014-6-8 14:53
杀鱼用四十度温水杀的死?


试了再来说话
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zxyso4作者
6年11个月前
43楼
fengjianhong 发表于 2014-6-8 20:31
请问楼主,那种外骨骼的螃蟹,虾啥的咋去肉呢


干式标本的话一节一节的取开取肉,或者从节间膜里掏出来,做染色的话把节间膜捅破用碱煮
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fengjianhong
6年11个月前
44楼
zxyso4 发表于 2014-6-8 23:18
干式标本的话一节一节的取开取肉,或者从节间膜里掏出来,做染色的话把节间膜捅破用碱煮


外骨骼的也能做得和小鱼这样吗?步骤上有啥区别
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zxyso4作者
6年11个月前
45楼
fengjianhong 发表于 2014-6-9 11:35
外骨骼的也能做得和小鱼这样吗?步骤上有啥区别


你要染色的话,就一样,不染色的话另有做法
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4869Aether
6年11个月前
46楼
可以用透明的环氧把甘油换出来么[s:1]
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zxyso4作者
6年11个月前
47楼
4869Aether 发表于 2014-6-13 18:14
可以用透明的环氧把甘油换出来么


没试过,不知道这两个是不是相溶,不过换出来折光率就不一样了
想做干制标本的话可以用梯度聚乙烯吡咯烷酮(PVP)溶液浸泡后取出风干
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打不死的小超
6年11个月前
48楼
这个可以用环氧树脂灌封么.....
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zxyso4作者
6年11个月前
49楼
打不死的小超 发表于 2014-6-14 16:56
这个可以用环氧树脂灌封么.....


可以实验一下
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au+
6年11个月前
50楼
瓶子能给个地址吗[s:104]
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